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洗衣粉抗(抑)菌效果鉴定试验_0

发布时间:2018-05-07 12:09:32 来源:欧贝特检测设备 浏览:

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洗衣粉抗(抑)菌效果鉴定试验 1 原 理本方法通过摹拟洗衣机的洗衣进程,检测除(杀)菌洗衣粉(剂)的抗菌作用。2 实验器材(1)实验菌株 大肠杆菌(8099或ATCC11229),金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)(2)培养基营养琼脂A 琼脂含量为1.5% 营养琼脂B在营养琼脂A中另加入1.5 %的琼脂 营养肉汤 胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA) (3)牛血清白蛋白(过滤除菌)(4)烷基酚聚氧乙烯醚(Tergitol)(5)碳酸钠 (6)标准硬水(7)非离子浸湿剂(8)冲洗溶液 (9)含0.5 % 吐温的磷酸盐缓冲液 (10)吐温80(过滤除菌)(11)无菌去离子水或蒸馏水(12)不锈钢转轴由

1 原 理

本方法通过摹拟洗衣机的洗衣进程,检测除(杀)菌洗衣粉(剂)的抗菌作用。

2 实验器材

(1)实验菌株 大肠杆菌(8099或ATCC11229),金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)

(2)培养基营养琼脂A 琼脂含量为1.5%

营养琼脂B在营养琼脂A中另加入1.5 %的琼脂

营养肉汤

胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA)

(3)牛血清白蛋白(过滤除菌)

(4)烷基酚聚氧乙烯醚(Tergitol)

(5)碳酸钠

(6)标准硬水

(7)非离子浸湿剂

(8)冲洗溶液

(9)含0.5 % 吐温的磷酸盐缓冲液

(10)吐温80(过滤除菌)

(11)无菌去离子水或蒸馏水

(12)不锈钢转轴由1条直径0.16cm 不锈钢丝制成

(13)有金属螺盖的玻璃罐容积为470mL,可高压灭菌,并可放入转轴的广口罐,将罐口覆盖牛皮纸,加盖,于121℃灭菌25min备用

(14)转动速度为45r/min~60r/min 的转动摇床

(15)可调恒温水浴箱

(16)吸管(1mL、5mL、10mL)

(17)培养皿

(18)铺有滤纸的玻璃培养皿

(19)菌种保存管

(20)细菌培养箱

(21)涡流振荡器

(22)细菌比浊仪

(23)棉布32织纱/cm × 32 织纱/cm 平织棉布

(24)别针、镊子、无菌手套、3mm~5mm玻璃珠、秒表、载体布片2.5cm×3.75cm

3 实验准备

(1)测试棉布的制备

1)非离子浸润剂的制备:取 5g烷基酚聚氧乙烯醚,5g 碳酸钠加入到1L 去离子水中。

2)洗涤液的制备:1.5g 非离子浸润剂,1.5g 碳酸钠,加入到3L去离子水中。 将大约300g 测试棉布加入3L 洗涤溶液,加热煮沸1h,取出棉布在煮沸的去离子水中清洗 5min,然后放入凉去离子水中 5min,以去除残留的浸润剂,然后将棉布晾干。

(2)测试棉布和转动支架的准备:取处理过的棉布,剪成5cm 宽,重量为15g 1g的布条,将其1端插入固定在测试转动支架的水平方向的外边,然后在3条水平支架间以足够的张力缠绕12个整圈,将布条的另外一端用不锈钢别针固定在前1圈布条上。最后以121℃压力蒸汽灭菌15min,备用。

(3)细菌悬液的制备:取0.5mL 营养肉汤冻干的菌种溶解,接种于含10mL 的营养肉汤的试管,于35℃2℃培养 24h。 然后振荡混合均匀。用10μL接种环在营养琼脂平板上划线,置于35℃2℃ 培养24h。然后从平板上挑取单个菌落种入菌种收藏管中,上下摇动10次,吸弃过剩液体,置 ⑻5℃冰箱保存。实验前,从菌种收藏管中取出1粒带菌小颗粒放入营养琼脂斜面,晃动斜面。将斜面至35℃培养24h。每天转种1次,连续传3代。
第4天,用5mL PBS洗脱斜面上的菌苔, 取0.5mL 加入到含9.5mL PBS的试管中,混匀,取1mL~2mL加入含有20mL 营养琼脂B的细胞培养瓶中,晃动培养瓶使菌液覆盖全部琼脂表面。吸弃过剩菌液,然后将培养瓶颠倒平放在35℃培养箱中培养24h。
用5mL PBS和3g 灭菌玻璃珠洗脱细胞瓶中的菌体,用PBS调剂浓度至1×108cfu/mL~5×108cfu/ml,然后加入等量 3.0% 的牛血清白蛋白。

(4)染菌载体的制备:每片载体接种20μL菌悬液,放回培养皿中,加盖,于35℃2℃ 在培养箱中干燥20min。

(5)测试样品的制备:最少在实验开始前20min, 将盛有265mL硬水的玻璃罐在水浴箱中恒温至测试温度(25℃1℃)。加入被测试样品混合溶解。

4 实验步骤

(1)将2片染菌载体放入转动支架的第6和7层布条之间,将第3片放入第7和8层布条之间。

(2)以无菌操作方式将转动单元(支架、布条和染菌载体)放入含有测试产品的玻璃罐中,加盖。

(3)玻璃罐固定在摇床上,转动旋转洗涤20min,取下玻璃罐。

(4)以无菌操作方式,取出转动单元,取出3片染菌载体,放入到含有 30mL 含0.5% 吐温80的PBS)的试管中,在振荡器中混合10s。然后振打200次, 用PBS做10倍系列稀释,并选择适合稀释度样液接种TSA平板。每一个稀释度接种2个平板。

(5)对比组除用 0.5% 吐温80替换测试产品外,其它实验条件和步骤均与实验组相同。

(6)菌数对比:将3片染菌载体加入含有30mL 0.5% 吐温80 的PBS试管中,在振荡器振荡10s,然后振打80次, 用PBS做系列10倍稀释,并取适合稀释度样液 1.0mL,以倾注法接种TSA平板,每一个稀释度接种2两个平板。

(7)将实验组、对比组和菌数对比组平板颠倒于 35℃?2℃ 培养箱中培养48h ? 4h,计数菌落数。

(8)以实验同批次的稀释液、培养基等分别设阴性对比。

(9)结果计算
实验重复3次。记录并计算测试样品的细菌总数,求其平均值。 用以下公式计算除菌率:
抑菌率(%)=(A-B)/A ×100%
其中A为实验前对比样品的菌落数;B为实验后实验样品的菌落数。

5 评价规定

各次阴性对比均无菌生长,对比组回收菌数应为1×106cfu/片~5×106
cfu/片,抑菌率到达50%者,判定为有抗菌作用。

6 注意事项

(1)将旋转单元放入玻璃罐后应将盖子盖紧,以防转动时漏水。

(2)实验时应严格无菌操作,以避免杂菌污染。







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